母猪繁殖障碍疾病的血清学调查报告

    摘要:随着猪场规模化、集约化程度的不断提高,猪病的种类也在不断增加,特别是近年来的母猪繁殖障碍性疾病严重制约生猪产业的发展。2004年我们引进了带有外种血缘的外种猪洋二元母猪，进行了优良品种推广，结果80%的猪场母猪普遍出现第一胎发生流产、早产、死胎，新生仔猪和断奶仔猪发病率和死亡率增高，高达20%，而母猪一般无临庆症状，对这情况我们凝似是母猪繁殖障碍性疾病，故进行了血清调查。共采血抽样237份，分离血清212份，并对分得的212份血清全部进行蓝耳病（PRRS）检测，其中阳性80份，阳性率%；对其中的160份血清进行了伪狂犬（PR）检测，160份进行了猪瘟（HC）检测，160份血清进行了细小病毒（PPV）检测。结果表明:一十三个猪场均有以上母猪繁殖障碍病存在。由此可见：母猪繁殖障碍病在我县外种猪场已普遍存在。
    关键词：母猪;繁殖与呼吸综合征;调查;血清学;检测
    As hog farms have increased in both size and efficiency,so have hog disease types,In rencent yesrs,the problem has been especially serious among breeding sows,where disease has increased inferticity and negatively affected the development of the hog breeding industry In2004,blood was collected from237sous From these,212samples of serum were successfully produced and tested for bluc Ear pisease (PRRS).The positive test rate Was percent (80 positive samples)Also tests for three types of disease porcine pseuudo rabies(PR),swine Fever(HC),and wicroscopic Viral infection (PPV)were performed,each test on160 of the samples.
    Sow;porcine reproductive and respiratory 
    母猪繁殖障碍疾病是近年来危害母猪的一种主要的疫病，现已被广范受到人们的重视，它以妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔、畸形胎和母猪不育、配不上种为主要特征的一类疾病。此病主要包括猪瘟(HC)、猪伪狂犬病(PR)、猪细小病毒病(PPV)、繁殖障碍与呼吸综合征(PRRS)和猪乙型脑炎(JE)等几种病。2004年我们对存在有明显繁殖障碍病的13个猪场的237母猪头进行采血，分离血清212份，并对分得的212份血清全部进行了检测，对其中的160份血清进行了猪伪狂犬、猪细小病毒检测，并根据检测结果对母猪繁殖障碍原因进行了分析总结，现将详细情况分述如下。
  材料和方法
     材料
     被检血清
   被检血清来13个母猪场，耳静脉采血，3600转/min分离血清，待检。
     主要诊断试剂
   蓝耳病ELISA试剂盒：由美国IDEXX公司提供；
   猪瘟诊断抗原及阴、阳性血清：由兰州兽医研究所提供；
   猪伪狂犬LAT诊断液试剂盒：由华中农业大学提供；
   猪细小病毒LAT诊断液试剂盒：由华中农业大学提供。
     方法
   母猪繁殖于呼吸综合症方法：间接ELISA
   A采样：常规采血，分离血清，无腐败、溶血、凝块和沉淀。
   B准备：
   A试验前将所有试剂从冰箱中取出，置室温下达到室温，并轻轻摇匀，用后立即放回冰箱。
   B将达到室温并完全溶解的洗液深缩用灭菌水或去离子水稀释10倍。
   C将待检血清用稀释液进行40倍稀释；注意匆将阳性/阴性对照血清稀释。
   C取出抗原孢被的96孔板（该板的1、3、5、7、9、11列孔包被的PRRS抗原，2、4、6、8、10、12列孔包被的正常MARC—145细胞抗原），在工作表上标记好样品的位置。
   D取100UL阴性血清分别加入C1、C2、D1、D2孔中。
   E取100UL阳性血清分别加入A1、A2、B1、B2孔中。
   F取100UL稀释的待检血清分别加入相邻的PRRS抗原孔和MARC—145细胞抗原孔（NHC）中。
   H在室温下孵育30mim。
   L将反应板孔里的液体倒入废液缸，并在吸水纸上扣干。
   J每孔加入300UL洗涤液（含Tween—20的PBS），置室温约3mim，弃去孔中液体，重复3—5次，最后一次在吸水纸水轻轻扣干。
   K每孔加入100UL酶标抗体复合物，在室温下孵育30mim。并利用此空隙，取等量底物浓缩液和底物稀释液混匀（如：）。
   L重复I、J操作。
M每孔加入100UL稀释好底物溶液，在室温下孵育15mim。
N每孔加入100  终止液
   O用酶联免疫检测仪于650NM波长下测定各孔的吸光度值。
   Q结果判定：
   a pc：PRRS—NC：PRRS≥，试验方成立。
   b S/P≥，样品血清PRRS抗体阳性；S/P＜，样品血清PRRS抗体阴性。
     猪瘟检测方法：正向血凝试验
   a取一洁净玻片，以蜡笔划成3—4c㎡小格，如下图
血清号 第1格 第2格 第3格 第4格
阳性血清对照
阴性血清对照
血清样品1
血清样品2
   b试验前，先将待检血清、标准血清和抗原置于室温，使其达到20℃。
   B将待检血清、标准血清按上表中的量，垂直接触玻片分别加到各方格内。
   C摇匀抗原，每一血清格内分别垂直加入抗原。
   D自血清格开始，用牙签将抗原与血清完全混合，摊开直径2CM左右，依次至、、血清格，一个血清样使用一牙签。
   E轻轻摇动玻片后，室温静置5—8min。春冬季节室温较低时，可置于30℃左右的温箱中。
   F记录结果
   出现大凝集片或小粒状物，液体完全透明，即100%凝集。
   有明显凝集片和粒，液体几乎完全透明，即75%凝集。
   有可见凝集片和颗粒，液体不甚透明，即50%凝集。
     猪伪狂犬检测方法：乳胶凝集试验
   操作步骤
   取待检样品、阳性/阴性对照血清和稀释液各一滴，分别置于玻片上，各加一滴乳胶抗原，用牙签或火柴棍搅拌，并轻轻摇动1—2min后，于3—5min内观察结果。
也可将血清作倍比连续稀释，每个稀释度加乳胶抗原进行定量分析。
C判定结果：
A所有对照成立，即阳性血清呈“   ”，阴性血清和稀释液呈“—”，试验方有效。样品出现“ ”以上者为阳性。
      猪细小病毒检测方法：乳胶凝集试验。
   调查内容
      流行病学调查：通过查阅记录，调查种源、胎次，发病的季节性。
      饲养管理调查：主要包括饲料质量，营养成份，有无霉变；有无环境、机械等不良因素引起的，防疫、免疫、消毒是否落实到位。
      临床病例剖解：包括对繁殖母猪的临床检查及对发病母猪所产部分弱仔及新生病仔猪的病理剖检观察。
      血清学检测：对采得的212份血清样品进行蓝耳病抗体检测和部分血清的伪狂犬、猪瘟、猪细小病毒检测。
   检测结果及讨论
    发生繁殖障碍的母猪有长白、约克及长白╳约克，发病母猪没有明显的品系差别；发病的胎次主要集中在第一胎，在第一胎过后，很多母猪不再表现明显的繁殖障碍病(说明在第一胎过后产生了抗体对该病有一定的免疫保护力)；发病没有季节性，一年四季均可发病；发病猪主要表现产死胎、木乃伊胎、弱仔和新生仔猪发病死亡。